경상남도 동물위생시험소

□ 소 결핵병(PPD, ELISA)검사법

○ 소, 사슴결핵병(PPD) 검사방법

1. 피내주사 반응 실시 방법

- 소,사슴 : 진단액 0.1ml를 미근부 주벽부 피내에 주사

- 주사후 48-72시간에 주사부위의 종장측정

2. 판 정

- 양성 : 주사부위의 종장차가 5㎜이상인 것.

- 음성 : 종장차가 3㎜이하인것.

- 의양성 : 종장차가 3㎜이상 5㎜이하이며, 양성이나 음성으로 판정하기 곤란한 것.

○ 우 결핵병ELISA(효소면역법) 시험방법

1. 혈청 분리(원심분리기)

2. 비동화(→ 56℃, 30min)하며,　실온에 30분 이상 KIT내의 시약들 꺼내어 둠

3. 96 well(ELISA용)에 혈청원액 50ul씩 분주

4. 접합체액 50ul씩 분주 ( 평균 6ml/plate )

 → 접합체액은 101배 희석하여 사용

5. 10sec 이상 shaking (by machine or hands)

6. Plate를 밀봉테이프로 밀봉하여 Incubator(37℃)에서 1hr 반응

7. 반응 후 각 well의 내용물 흡입후 세척액으로 6회 세척후 바로 기질액 첨가

8. 은박지로 덮은 후 실온에서 15min 반응

9. 반응 정지액 100ul씩 분주 후 잘 혼합(청색이 노란색으로 변하게 한다)

10. 음성대조액, 양성대조액 각 검체의 흡광도 측정 (측정파장:450nm, 이중파장:620nm)

○ 결과 해석

1. 결과 판정은 S/P ratio로 한다

S/P ratio = (샘플흡광도-음성대조액 평균 흡광도)÷(양성대조액 평균 흡광도-음성대조액 평균 흡광도)

2. 판정기준값(S/P ratio)